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    CCK-8細胞增殖與毒性檢測試劑盒優勢與使用方法

    更新時間:2024-01-26      點擊次數:289

    Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒),是一種基于WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度的比色檢測試劑盒。檢測原理為:WST-8在電子耦合劑1-Methoxy PMS存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜(formazan,參考圖1),生成的甲臜的顏色深淺與細胞增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450nm 波長處測定OD 值,間接反映活細胞數量。本產品可用于細胞增殖測定,細胞毒性的檢測,藥物篩選,以及細胞生長抑制檢測等。

    CCK-8法的優勢

    檢測方法MTT法XTT法WST-1法CCK-8法
    產品性狀粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液
    使用方法配成溶液后使用現配現用即開即用即開即用
    檢測靈敏度很高很高
    檢測時間較長較短較短最短
    檢測波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm
    細胞毒性高,細胞形態*消失很低,細胞形態不變很低,細胞形態不變很低,細胞形態不變
    試劑穩定性一般較差一般很好
    批量樣品檢測可以非常適合非常適合非常適合
    便捷程度一般便捷便捷非常便捷

    運輸與保存
    藍冰運輸。-20℃保存,有效期24個月。【注】:反復凍融會造成測定背景OD值升高。
    使用方法

    1. 以96孔板為例,96孔板中每孔接種100 μL的細胞懸液,在細胞培養箱預培養24 h。

    2. 向每孔加入10 μL不同濃度的待測物質。如果僅測定細胞活性,則不需要2~3步驟,直接從第四步操作。

    3. 將培養板在培養箱孵育一段適當的時間 (依據待測藥物而定)。

    4. 向每孔加入10 μL CCK-8溶液 (注意不要產生氣泡,輕輕混勻)。

    5. 將培養板在培養箱內孵育適當時間(一般0.5~2 h)。

    6. 酶標儀測定450 nm處的吸光值。

    注意事項

    1. 本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

    2. 建議調試合適的接種細胞的數量和加入CCK-8溶液后培養的時間。當使用標準96 孔板時,貼壁細胞至少1000 個/ 孔(100 μL 培養基),白細胞至少2500 個/ 孔(100 μL 培養基)。建議實驗前設定幾個不同細胞數量的梯度孔進行條件測試,細胞培養時間和處理方法根據實驗情況而定,加入CCK-8溶液后(加入體積為每孔細胞培養液體積的10%),在37℃細胞培養箱中孵育,不同時間點后測450 nm處的吸光值(CCK-8敏感性高,一些細胞0.5 h后就可以測定第一次)。

    3. CCK-8試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化反應,如果待檢測體系中有較多還原劑(或抗氧化劑)會造成背景OD值升高,干擾檢測結果。如果實驗中有還原劑,請檢查背景的OD值,設法先去除還原劑干擾。例如,可在加入CCK-8溶液之前更換新鮮的培養基,以去除待測藥物的影響。當待測藥物影響比較小時,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入待測藥物后的空白吸收即可。

    4. 進行藥物抑制實驗時,如果藥物中含有金屬,如Pb2+、Fe2+、Cu2+等金屬會對CCK-8 Solution的顯色反應產生影響,從而導致檢測的靈敏度降低。

    5. 如果細胞培養時間較長,培養基顏色發生變化,應洗滌細胞更換培養基后再加CCK-8檢測。細胞培養基酚紅不影響測定結果。

    6. 為使CCK-8試劑盒培養基充分混勻,減少CCK-8在移液器上的殘留,建議加樣前用培養基稀釋CCK-8試劑,混勻后加樣。

    7. 若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入0.1 M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液,室溫避光保存,24 h 內檢測,吸光度不會受到影響。(加入1% SDS 溶液的體積與加入CCK-8溶液的體積相同)。

    8. 如果吸光值很低,可以適當增加細胞數量或者延長加入CCK-8溶液后孵育的時間。

    9. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


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